邵春奎教授：挖掘CTC的蛛丝马迹，打造肿瘤早筛利器

（一）CTC的富集方法

常见的富集方法主要有滤膜法ISET、免疫磁珠（正向、负向富集）和微流控技术。

• 滤膜法ISET：采用直径8μm滤膜来回收CTC，操作简单，成本低廉。

• 免疫磁珠正向富集：基于CTC表面抗原设计磁珠，通过免疫反应富集高纯度的CTC。

• 免疫磁珠反向富集：基于血液中的白细胞表面抗原设计抗体磁珠，通过免疫反应最大限度去除白细胞，实现最大限度保留CTC。

• 微流控技术：样本量少，可实现高通量。但目前尚处于临床验证阶段。

国内目前有两个获批的CTC富集系统，分别是华得森生物的CytoSorter^®CTC检测系统和德路通循环上皮细胞采集器CellCollector。

华得森生物的CytoSorter^®CTC检测系统于2021年7月份获批，是国内第一张CTCⅢ类注册证产品。

该系统基于微流控和免疫捕获技术，需与获批的配套试剂盒配合使用。在临床上用于对人外周血来源的循环上皮源肿瘤细胞进行分离富集，以及后续的细胞鉴定分析和伴随诊断的临床应用。

德路通循环上皮细胞采集器CellCollector由德国Gilupi公司研发生产，于2012年底获CE认证、2017年5月获国家药监局（NMPA）Ⅲ类认证。

该产品采用纳米涂层技术，利用抗原抗体免疫反应，从患者外周血中捕获CTC，可用于复发转移性乳腺癌患者采集外周血循环上皮细胞的监测分析。

（二）CTC的分析方法

常见的鉴定分析方法主要基于细胞表面抗原、细胞内特异基因序列和基于肿瘤细胞特异性表面叶酸抗体。

• 基于细胞表面抗原：基于CTC表面特异性抗原（EpCAM、HER2等），通过免疫荧光染色（IF），并在显微镜下观察CTC。

• 基于细胞内特异基因序列：FISH、靶向PCR、二代测序、RT-PCR、基因表达谱等。

• 基于肿瘤细胞特异性表面叶酸受体（FR）：FR与标记探针结合，切下结合探针的MicroDNA进行定量扩增，通过扩增曲线计算CTC数量。

据不完全统计，世界范围内CTC检测产品目前有四五十个。

强生的CellSearch是全球首个商用的CTC检测产品，在2004年由FDA批准上市，2012年获MNPA批准。

该系统基于EpCAM的免疫磁珠正向富集CTC，采用荧光免疫技术进行分析检测，主要用于对恶性肿瘤患者进行动态监测，辅助判断疾病进程或治疗效果。

格诺生物的叶酸受体阳性CTC检测技术（以下简称FR+CTC），则是国内首个获得NMPA批准的Ⅲ类注册证的CTC检测试剂。FR+CTC于2016年获批，2020年12月成功续证，涵盖了CTC富集和分析的一体化检测试剂。

该技术基于免疫磁珠负向富集和靶向PCR技术，通过FR特异性识别，用于体外定量检测人体全血中叶酸受体阳性细胞。

叶酸是肿瘤细胞在生长增殖过程中合成DNA的必要因素，肿瘤细胞通过叶酸受体（FR）摄取叶酸。因此，各类肿瘤细胞表面抗原高表达FR。所以，可以通过FR识别肿瘤细胞。

研究表明，FR在多种癌症中高度表达，是检测的有效靶点，应用于肿瘤诊疗各个阶段。

如：乳腺癌组织的FR阳性率为32%-80%、肺癌组织中FR阳性率为78%。

经临床大数据验证，FR+CTC兼具高灵敏度和高特异性，可以提高肿瘤早期发现率，有效监测治疗及预后预测，是实现肿瘤精准诊疗非常有价值的工具。

图源：邵春奎演讲PPT